B7配體家族和CD28受體家族成員之間的相互作用提供了免疫細胞的共刺激或共抑制作用，調(diào)節(jié)免疫細胞的活化和耐受性，對于對外來病原體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)和適當終止免疫反應(yīng)以防止炎癥誘導的組織損傷至關(guān)重要。

（數(shù)據(jù)來源 Yang S, et al. Int J Biol Sci. 2020）

一般將B7-CD28共刺激信號軸分為3組：第一組，由B7-1（CD80）/B7-2（CD86）/CD208 /CTLA4和B7-H2（ICOSL）/ICOS 組成；第二組含有B7-DC（PD-L1）/B7-H1（PD-L2）/PD-1；第三組包括B7-H3（CD276），B7-H4，B7-H6/NKp30和B7-H7/B7-H5（HHLA2）/ TMIGD2（IGPR-1/CD28H）。第一組途徑在調(diào)節(jié)中樞免疫耐受中很重要，而第二、三組在外周免疫調(diào)節(jié)中很重要。在本文中，我們重點介紹CD28家族“族長”CD28。

1、CD28靶點概述

CD28作為第一個被發(fā)現(xiàn)的共刺激受體，是以胞外變體免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域為特征的共刺激分子亞家族的創(chuàng)始成員。CD28主要作為“第二信號”（與靶細胞表面的B7-1/B7-2結(jié)合）降低有效活化T細胞所需的閾值，強化激活T細胞的“第一信號”（T細胞受體（TCR）-CD3復合物對靶細胞的MHC-多肽識別和結(jié)合），使T細胞進一步發(fā)育，增殖為具有免疫功能的細胞。

（數(shù)據(jù)來源 Skokos D, et al. Sci Transl Med. 2020）

同時CD28和共抑制受體CTLA-4與其共享的配體B7-1和B7-2構(gòu)成了特征最明確的調(diào)節(jié)T細胞途徑，是其他共刺激和共抑制途徑的范例。（關(guān)于CTLA-4負反饋調(diào)節(jié)下篇文章再補述）

（數(shù)據(jù)來源 Rudd CE, et al. Immunol Rev. 2009）

基于CD28共刺激對于T細胞活化的重要性，因此通過激活或阻斷CD28/B7-1（CD80）/B7-2（CD86）途徑進行免疫調(diào)節(jié)是一種有前途的方法：可以防止在移植過程中不適當?shù)氐腡細胞活化排異反應(yīng)，或治療T細胞介導的自身免疫性疾病。

（數(shù)據(jù)來源 Edner NM, et al. Nat Rev Drug Discov. 2020）

2、CD28靶點開發(fā)

雖然CD28靶點機制清晰，而且作為一個老靶點，針對不同臨床適應(yīng)癥，既可開發(fā)拮抗劑也可開發(fā)激動劑，理應(yīng)前景無限，但目前只有少量抗體藥物開發(fā)管線，主要跟早期一段CD28激動劑TGN1412臨床事件歷史有關(guān)（在2006年3月CD28超激動劑抗體TGN1412（TeGenero開發(fā)，試驗失敗后破產(chǎn)）治療風濕性關(guān)節(jié)炎I期臨床試驗中，六名志愿者在遭受了威脅生命的細胞因子釋放綜合征，而這在臨床前動物模型研究中完全沒有預測到，后續(xù)分析主要原因在于試驗動物太過“干凈”，并未積累足夠的效應(yīng)T細胞（TEM 細胞，促炎癥因子主要來源）；另外測試的獼猴效應(yīng)T細胞表位缺乏CD28，這些導致對臨床階段的用藥計量指導出現(xiàn)大的偏差）。這次嚴重的臨床事件也直接打斷了大家對CD28的憧憬。CD28 研發(fā)管線如下：

（數(shù)據(jù)來源 clinicaltrials, 各公司官網(wǎng)）

目前臨床藥物開發(fā)上主要集中在 3 個方面：CD28 關(guān)聯(lián)靶點融合蛋白藥物；單抗藥物；多特異性抗體藥物。下面我們來一一展開敘述。

2.1 CD28靶點融合蛋白藥物

這里就涉及到于CD28關(guān)聯(lián)的B7-1（CD80）/B7-2（CD86）/B7-H2（ICOSL）和CTLA4，無論是天然配體還是共配體競爭關(guān)系，都開發(fā)了各類融合 -FC 重組蛋白。

• 百時美施貴寶 & abatacept/belatacept

百時美施貴寶開發(fā)的兩款上市CTLA-4-Fc融合蛋白，通過與抗原呈遞細胞（APC）上的共刺激分子CD80和CD86結(jié)合，從而阻斷與T細胞上CD28的相互作用，抑制T細胞的激活；

（數(shù)據(jù)來源 Moreland L, et al. Nat Rev Drug Discov. 2006）

• Five Prime & FPT155

Five Prime公司是一家臨床階段生物技術(shù)公司，專注于蛋白質(zhì)療法的研究和開發(fā)，旗下FPT155使用可溶性 CD80融合蛋白：直接參與CD28增強其共刺激活性；阻止CTLA-4競爭內(nèi)源性CD80，從而使CD28信號傳導在T細胞活化中占主導地位。

（數(shù)據(jù)來源 Five Prime 官網(wǎng)）

• Alpine Immune & ALPN-101/ALPN-202

Alpine Immune是一家位于華盛頓的生物科技公司，致力于發(fā)現(xiàn)和開發(fā)基于蛋白質(zhì)的免疫療法。其中ALPN-101和ALPN-202都極具特色，可以說是把CD28激動劑/抑制劑融合蛋白開發(fā)的爐火純青（ALPN-101是CD28和ICOS-T細胞共刺激途徑的雙重抑制劑，通過同時阻斷兩個關(guān)鍵的共刺激途徑，改善患有嚴重自身免疫/炎性疾病的患者的預后；而ALPN-202能夠結(jié)合在腫瘤上表達的PD-L1，阻止PD-L1/PD-1相互作用。同時通過結(jié)合CD28（PD-L1依賴性CD28共刺激）驅(qū)動T細胞活化。另外，ALPN-202結(jié)合在 T細胞上表達的CTLA-4阻斷CTLA4-CD80/CD86相互作用，從而進一步增強T細胞活性），這也吸引了艾伯維與Alpine Immune簽署了針對ALPN-101的8.65億美元的全球獨家選擇權(quán)和許可協(xié)議。

（數(shù)據(jù)來源 Alpine Immune 官網(wǎng)）

2.2 CD28單抗藥物

• TheraMab & TGN1412重生

從TGN1412事件中也能看出CD28激動劑抗體強大的T細胞激活能力，所以之后TGN1412 仍能被莫斯科一家生物企業(yè)TheraMab收購得以保留，并被重命名為TAB08，同時在原來劑量基礎(chǔ)上降低到千分之一繼續(xù)臨床試驗探索：1期安全性試驗顯示出良好耐受性，雖已完成多項 2 期試驗，不過結(jié)果遲遲沒有公布。而且TAB08選擇的適應(yīng)癥多是自身免疫 / 炎癥性疾病，大家可能會奇怪，這跟其他 CD28 激動劑功能明顯相沖突（其他激動劑主要發(fā)揮增強免疫和促炎癥），主要因為 TAB08 下調(diào)謹慎的低劑量，選擇性地優(yōu)先靶向激活調(diào)節(jié)性T細胞（T-Reg）群（免疫抑制性T細胞亞群），而非傳統(tǒng)T細胞。（但這里的具體機制，筆者有個困惑：因為早期研究表明（Zheng Y, et al. J Immunol. 2004）調(diào)節(jié)性 T 細胞（T-Reg）表面 CD28 激活信號抑制 Treg 的抑制功能。如果 TAB08 作為選擇性靶向激活 CD28+Treg，應(yīng)該是下調(diào)Treg的抑制功能，這也失去治療自身免疫/炎癥性疾病的意義。而且這也跟下面FR104的作用機制是相沖突的。）

• OSE Immuno & FR-104

OSE Pharma是巴黎一家開發(fā)特異性免疫療法激活T淋巴細胞的生物公司。作為靶向CD28拮抗劑單抗藥物，F(xiàn)R104靶向CD28配體結(jié)合基序重疊表位 MYPPPY，抑制CD28與B7-1/B7-2的結(jié)合途徑，下調(diào)效應(yīng)T細胞，同時能促進調(diào)節(jié)性T細胞（T-Reg）活性。1期臨床研究已顯示出有效性，良好的安全性和2期推薦劑量的初步信號，進一步支持了該資產(chǎn)在自身免疫性疾病或移植中的持續(xù)臨床開發(fā)。強生以1.73億美元獲得了FR-104全球研發(fā)和商業(yè)化權(quán)利授權(quán)。

（數(shù)據(jù)來源 OSE Pharma 官網(wǎng)）

2.3 CD28多特異性抗體藥物

CD28多特異性抗體藥物是近兩年賽諾菲和再生元最新研發(fā)成果，這種設(shè)計思路弱化了CD28單靶向激活抗體劑量問題引起的細胞因子釋放綜合征（CRS），可以用低劑量發(fā)揮最大T細胞活化功能；同時將T細胞和靶細胞聚集在一起讓抗腫瘤更高效。兩家公司也讓 CD28 激活劑抗體重新煥發(fā)光彩。

• 再生元 & REGN7075 / REGN5678

再生元在 2020 年公布了REGN5678（PSMA-CD28 雙特異性抗體）臨床前的研發(fā)數(shù)據(jù)：共刺激型CD28雙抗，在動物實驗中搭配CD3雙抗明顯增強了療效，且沒有細胞因子釋放綜合征風險。基于該設(shè)計后來又拓展了REGN7075（BCMA-CD28 雙特異性抗體）管線，目前正在穩(wěn)步快速推進至 2 期階段。

（數(shù)據(jù)來源 Skokos D, et al. Sci Transl Med. 2020）

• 賽諾菲 & SAR442257

賽諾菲在傳統(tǒng) CD3 雙抗的基礎(chǔ)上引入 CD28，形成同時靶向 CD38/CD3/CD28 的三特異性抗體SAR442257。SAR442257 顯著提高了 T 細胞靶向多發(fā)性骨髓瘤細胞的能力，然后通過 TCR/CD3 的“第一信號”和 CD28 的“第二信號”通路激活 T 細胞，進而表現(xiàn)出強大抗腫瘤活性。

（數(shù)據(jù)來源 Garfall AL, et al. Nature. 2019）

3、CD28小結(jié)

了解 CD80 和 CD86 配體如何與 CD28 和 CTLA-4 相互作用對于 CD28 靶向調(diào)節(jié)劑開發(fā)中發(fā)揮免疫活化或抑制至關(guān)重要；同時弱化 CD28 激活劑強大的 T 細胞活化能力引起的細胞因子風暴風險，再生元和賽諾菲已經(jīng)做出了很好的表率，進一步的數(shù)據(jù)也許會讓 CD28再次火熱起來。

4、締碼生物CD28相關(guān)產(chǎn)品助力藥物研發(fā)

締碼生物科技有限公司是一家專注于可成藥靶點臨床前研發(fā)產(chǎn)品和服務(wù)的生物技術(shù)公司。締碼現(xiàn)可提供CD28靶點全系列產(chǎn)品與服務(wù)。產(chǎn)品包括活性蛋白、參照抗體和流式驗證單克隆抗體；服務(wù)涵蓋多種屬蛋白抗體定制服務(wù)、抗體人源化和親和力成熟服務(wù)。此外，為加速CD28生物療法的開發(fā)，締碼還制備了CD28靶點單B細胞種子庫，最快28天可獲得先導抗體分子；同時，我們目前已篩選出10個CD28抗體分子，客戶第二天可以拿到分子進行功能評估驗證，詳情歡迎垂詢。

• 重組蛋白&抗體&穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株產(chǎn)品

產(chǎn)品類型	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱
重組蛋白	PME100014	Human CD28 Protein, mFc-His Tag
	PME101387	Human CD28 Protein, His Tag
	PME-M100009	Mouse CD28 Protein, hFc Tag
流式抗體	DME100063	Anti-CD28 antibody(DM63); Rabbit mAb
生物素標記抗體	DME100063B	Biotinylated Anti-CD28 antibody(DM63); Rabbit mAb
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株	CEL100041	Hu_CD28 K562 Cell Line

• 締碼生物CD28先導分子研究進展